歡迎光臨上海聯(lián)祖生物科技有限公司!
3191886983@qq.com 021-61210612
產(chǎn)品搜索
產(chǎn)品導航
轉基因元件7S 3‘終止子PCR試劑盒供應商
  • 品牌:聯(lián)祖
  • 產(chǎn)地:進(jìn)口、國產(chǎn)
  • 貨號:LZR86013
  • 價(jià)格: ¥電詢(xún)
  • 發(fā)布日期: 2020-11-26
  • 更新日期: 2024-07-18
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 進(jìn)口、國產(chǎn)
品牌 聯(lián)祖
貨號 LZR86013
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
純度 %
規格 50次
是否進(jìn)口

參數規格:

產(chǎn)品名稱(chēng):轉基因元件7S 3‘終止子PCR試劑盒供應商

貨號:LZR86013

產(chǎn)品規格:50次

產(chǎn)品運輸:低溫運輸

產(chǎn)品保存:-20℃保存

產(chǎn)品有效期:一年

產(chǎn)品特點(diǎn):

產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品就是根據保守區設計引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。

產(chǎn)品特點(diǎn):

◇高特異性:與其他病毒無(wú)交叉反應,無(wú)非特異性擴增;

◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;

◇操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測;

◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

 

需要注意:

PCR反應液請在冰中配制,然后置于PCR反應儀上進(jìn)行PCR反應。這種冷啟動(dòng)法(Cool Start Method)與熱啟動(dòng)法(Hot Start Method)相結合,更能有效地減少PCR過(guò)程中的非特異性反應,增強PCR擴增的特異性,能得到良好的PCR結果。

PCR的反應條件:

因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。

◇ 循環(huán)次數

根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個(gè)循環(huán)。

如果循環(huán)次數太少,擴增量不足;如果循環(huán)次數太多,則會(huì )出現Smear。

◇ Anneal以及Extension

合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實(shí)驗可2℃間隔進(jìn)行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí),每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設定可稍長(cháng)一些。通常,Anneal溫度太高,有時(shí)會(huì )得不到擴增產(chǎn)物;Anneal溫度太低時(shí),容易發(fā)生非特異性反應。另外,Extension時(shí)間太短時(shí),會(huì )得不到擴增產(chǎn)物或者會(huì )有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成;而Extension時(shí)間太長(cháng)時(shí),會(huì )出現Smear。

 

使用方法

一、樣品 DNA 的制備

1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。

2.如果有 N 個(gè)樣品,則需要做 N+2 個(gè)提取,包括一個(gè)陽(yáng)性對照和一個(gè)陰性對照。陽(yáng)性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽(yáng)性對照作為陽(yáng)性對照,陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結束后,*得到 200μL 模板 DNA(每個(gè)樣品)放冰上待用,溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL,否則PCR 抑制物很可能會(huì )抑制 PCR。二、PCR(60 μL 體系)

3.樣品管:在 N+2 個(gè)PCR 管中加入下列成分:成分 N 個(gè)樣品管 陰性對照 陽(yáng)性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽(yáng)性對照(純化后) - 18 μL - 陰性對照(純化后) - - 18 μL電泳檢測

4.取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳(本產(chǎn)品不需要單獨加loading buffer),使用 100 bp DNA Marker,如果樣品為陽(yáng)性,將會(huì )得到長(cháng)度為 3582 bp 的擴增產(chǎn)物。

二反應的準備:   

待各組份融化后先瞬時(shí)離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實(shí)驗需加一個(gè)陰性和一個(gè)陽(yáng)性對照,測試反應管可以有多個(gè)。配制過(guò)程中應注意無(wú)菌,戴口罩,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風(fēng)壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進(jìn)行操作。建議配制完畢后瞬時(shí)離心以使液體沉至管底。   

三、PCR反應:   

降落PCR法(Touchdown PCR):94℃變性2分鐘;首循環(huán):94℃變性30秒,68℃退火30秒,72℃延伸45秒;從八個(gè)循環(huán)開(kāi)始,每循環(huán)退火溫度下降1℃,其余不變;從第九個(gè)循環(huán)開(kāi)始,反應條件固定為:94℃變性30秒,60℃退火30秒,72℃延伸45秒,循環(huán)32次;循環(huán)結束后,在72℃延伸7分鐘,*保持在4℃。

卷柏(卷柏)英文名稱(chēng):Juan Bai (Juan Bai)雞抗肌內膜抗體IgA(EMA IgA)ELISA試劑盒 規格:2g保存:-20℃,避光

卷曲英文名稱(chēng):Capreomycin大鼠巨噬細胞替代激活相關(guān)學(xué)因子1(AmAC-1)ELISA試劑盒 規格:200mg保存:-20℃,避光

決明子英文名稱(chēng):Cassia seed人Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)ELISA試劑盒規格:0.5g保存:-20℃,避光

決明子(小決明)英文名稱(chēng):Cassia (Cassia tora L.)大鼠熱休克蛋白47(HSP47)ELISA試劑盒規格:0.5g保存:-20℃,避光

爵床英文名稱(chēng):Justicia人類(lèi)白細胞抗原G(HLA-G)ELISA試劑盒規格:1g保存:-20℃,避光

堿英文名稱(chēng):Kaba choline人胎盤(pán)蛋白(PP)ELISA試劑盒 規格:30mg保存:-20℃,避光

卡多巴英文名稱(chēng):Cabi do Ba人激肽釋放酶10(KLK 10)ELISA試劑盒規格:100mg保存:-20℃,避光

卡鉑英文名稱(chēng):Carboplatin人同型半胱(Hcy)ELISA試劑盒規格:50mg保存:-20℃,避光

卡絡(luò )鈉英文名稱(chēng):Carbazochrome sodium sulfonate人髓系細胞觸發(fā)受體-1(TREM-1)ELISA試劑盒規格:50mg保存:-20℃,避光

卡馬西平英文名稱(chēng):C Masi Bing人血紅素氧合酶2(HO-2)ELISA試劑盒規格:100mg保存:-20℃,避光

卡莫氟英文名稱(chēng):Kamo人胎盤(pán)生長(cháng)因子(PLGF)ELISA試劑盒規格:50mg保存:-20℃,避光

卡那英文名稱(chēng):Kanamycin大鼠抗IgE受體抗體ELISA試劑盒規格:200mg保存:-20℃,避光

卡那B英文名稱(chēng):Kanamycin B大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA試劑盒規格:50mg保存:-20℃,避光

卡前列英文名稱(chēng):Carboprost methylate人銅藍蛋白(CP/CER)ELISA試劑盒規格:30mg保存:-20℃,避光

卡托普利英文名稱(chēng):Kato Pury人透明質(zhì)結合蛋白(HABP)ELISA試劑盒規格:100mg保存:-20℃,避光

6-Thioguanine,≥98%小鼠抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA) 進(jìn)口/國產(chǎn)

Gefitinib,99%大鼠抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA) 進(jìn)口/國產(chǎn)

2,5-Dihydroxyterephthalic acid,98%牛的牛血清白蛋白殘留檢測 進(jìn)口/國產(chǎn)

Calcium dodecylbenzenesulfonate,98%人的牛血清白蛋白殘留檢測 進(jìn)口/國產(chǎn)

Ferric pyrophosphate小鼠的牛血清白蛋白殘留檢測 進(jìn)口/國產(chǎn)

11-Mercaptoundecanoic acid,95%大鼠的牛血清白蛋白殘留檢測 進(jìn)口/國產(chǎn)

2-Diethylaminoethyl hexanoate,98%人β2糖蛋白1抗體IgG(β2-GP1 Ab IgG) 進(jìn)口/國產(chǎn)

Phlorin (HPLC,≥98%)人β2糖蛋白1抗體IgM(β2-GP1 Ab IgM) 進(jìn)口/國產(chǎn)
轉基因元件7S 3‘終止子PCR試劑盒供應商Botryosphaeria│dothidea (Moug.) Ces. & De Not.分離基物: 蘋(píng)果果實(shí)提供形式: 斜面培養物模式菌株: no培養基: 14生長(cháng)條件: 25存儲條件: 定期移植法

Bacillus│thuringiensis分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養物;凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領(lǐng)域: 生物殺蟲(chóng)劑培養基: 2生長(cháng)條件: 37℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法

Micromonospora│sp.分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領(lǐng)域: 抗恥垢分枝桿菌培養基: CM0027生長(cháng)條件: 28C存儲條件: 真空冷凍干燥

Thielavia│sepedonium分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領(lǐng)域: 分解纖維素培養基: 0014生長(cháng)條件: 25-28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

博德特氏菌種屬: Bordetella│bronchiseptica提供形式: 斜面培養物安全等級: 2模式菌株: no應用領(lǐng)域: 測定多黏菌素B效價(jià)培養基: CM0119生長(cháng)條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法

Streptococcus│suis分離基物: 豬料提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no應用領(lǐng)域: 用于科研培養基: 396生長(cháng)條件: 37存儲條件: 真空冷凍干燥法;

Bacillus│subtilis分離基物: 豆豉提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領(lǐng)域: 用于產(chǎn)纖溶酶的研究培養基: CM0002生長(cháng)條件: 30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Clostridium│tetani提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no培養基: CM0121生長(cháng)條件: 37℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

分枝桿菌種屬: Mycobacterium│Mycobacterium goodii提供形式: 凍干物安全等級: 3模式菌株: no應用領(lǐng)域: 研究生長(cháng)條件: 37存儲條件: 真空冷凍干燥法
標準操作步驟:

產(chǎn)品僅用于科研如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1.液氮充分研磨樣品。

2.收集研磨成粉末的50mg樣品,置于1.5ml離心管中。

3.加入350μl65℃預熱的緩沖液IL,并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩,確保所有的組織團都分散均勻。

4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數次。

5.加入350μl氯仿,充分混勻,12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉移。

7.加入4μl RNase A,渦旋混勻。室溫放置2min。

8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無(wú)水乙醇,充分混勻。如:向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無(wú)水乙醇。

9.把上述混勻的液體轉移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結合DNA,棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過(guò)柱。

10.將吸附柱重新套回收集管中,加入500μl緩沖液WB至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;

11.將吸附柱重新套回收集管中,加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;

注意:DNA Wash Buffer使用前須按要求用無(wú)水乙醇稀釋。如果放入冰箱中,使用前須恢復到室溫。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,8,000×g離心1min,棄去流出液;

13.將吸附柱重新套回2ml收集管中,*轉速(>13000×g)離心空結合柱1min以干燥柱子的基質(zhì);這一步對下面的洗脫步驟至關(guān)重要。

14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管,加入50-150μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min;

15. 室溫下,離心(>13000)1min,以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。


国产精品爽爽ⅤA在线观看,最近韩国日本免费观看,国产免费AV片在线观看播放,久久精品国产精品亚洲色婷婷