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轉基因元件pUbi PCR試劑盒規格
  • 品牌:聯(lián)祖
  • 產(chǎn)地:進(jìn)口、國產(chǎn)
  • 貨號:LZR86072
  • 價(jià)格: ¥電詢(xún)
  • 發(fā)布日期: 2020-11-26
  • 更新日期: 2024-07-18
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 進(jìn)口、國產(chǎn)
品牌 聯(lián)祖
貨號 LZR86072
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
純度 %
規格 50次
是否進(jìn)口

產(chǎn)品特點(diǎn):

◇高特異性:與其他病毒無(wú)交叉反應,無(wú)非特異性擴增;

◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;

◇操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測;

◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

參數規格:

產(chǎn)品名稱(chēng):轉基因元件pUbi PCR試劑盒規格

貨號:LZR86072

產(chǎn)品規格:50次

產(chǎn)品運輸:低溫運輸

產(chǎn)品保存:-20℃保存

產(chǎn)品有效期:一年

產(chǎn)品特點(diǎn):

產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品就是根據保守區設計引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。

 

需要注意:

PCR反應液請在冰中配制,然后置于PCR反應儀上進(jìn)行PCR反應。這種冷啟動(dòng)法(Cool Start Method)與熱啟動(dòng)法(Hot Start Method)相結合,更能有效地減少PCR過(guò)程中的非特異性反應,增強PCR擴增的特異性,能得到良好的PCR結果。

PCR的反應條件:

因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。

◇ 循環(huán)次數

根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個(gè)循環(huán)。

如果循環(huán)次數太少,擴增量不足;如果循環(huán)次數太多,則會(huì )出現Smear。

◇ Anneal以及Extension

合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實(shí)驗可2℃間隔進(jìn)行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí),每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設定可稍長(cháng)一些。通常,Anneal溫度太高,有時(shí)會(huì )得不到擴增產(chǎn)物;Anneal溫度太低時(shí),容易發(fā)生非特異性反應。另外,Extension時(shí)間太短時(shí),會(huì )得不到擴增產(chǎn)物或者會(huì )有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成;而Extension時(shí)間太長(cháng)時(shí),會(huì )出現Smear。

 

使用方法

一、樣品 DNA 的制備

1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。

2.如果有 N 個(gè)樣品,則需要做 N+2 個(gè)提取,包括一個(gè)陽(yáng)性對照和一個(gè)陰性對照。陽(yáng)性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽(yáng)性對照作為陽(yáng)性對照,陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結束后,*得到 200μL 模板 DNA(每個(gè)樣品)放冰上待用,溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL,否則PCR 抑制物很可能會(huì )抑制 PCR。二、PCR(60 μL 體系)

3.樣品管:在 N+2 個(gè)PCR 管中加入下列成分:成分 N 個(gè)樣品管 陰性對照 陽(yáng)性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽(yáng)性對照(純化后) - 18 μL - 陰性對照(純化后) - - 18 μL電泳檢測

4.取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳(本產(chǎn)品不需要單獨加loading buffer),使用 100 bp DNA Marker,如果樣品為陽(yáng)性,將會(huì )得到長(cháng)度為 3582 bp 的擴增產(chǎn)物。

二反應的準備:   

待各組份融化后先瞬時(shí)離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實(shí)驗需加一個(gè)陰性和一個(gè)陽(yáng)性對照,測試反應管可以有多個(gè)。配制過(guò)程中應注意無(wú)菌,戴口罩,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風(fēng)壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進(jìn)行操作。建議配制完畢后瞬時(shí)離心以使液體沉至管底。   

三、PCR反應:   

降落PCR法(Touchdown PCR):94℃變性2分鐘;首循環(huán):94℃變性30秒,68℃退火30秒,72℃延伸45秒;八個(gè)循環(huán)開(kāi)始,每循環(huán)退火溫度下降1℃,其余不變;從第九個(gè)循環(huán)開(kāi)始,反應條件固定為:94℃變性30秒,60℃退火30秒,72℃延伸45秒,循環(huán)32次;循環(huán)結束后,在72℃延伸7分鐘,*保持在4℃。

標準操作步驟:

產(chǎn)品僅用于科研如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1.液氮充分研磨樣品。

2.收集研磨成粉末的50mg樣品,置于1.5ml離心管中。

3.加入350μl65℃預熱的緩沖液IL,并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩,確保所有的組織團都分散均勻。

4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數次。

5.加入350μl氯仿,充分混勻,12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉移。

7.加入4μl RNase A,渦旋混勻。室溫放置2min。

8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無(wú)水乙醇,充分混勻。如:向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無(wú)水乙醇。

9.把上述混勻的液體轉移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結合DNA,棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過(guò)柱。

10.將吸附柱重新套回收集管中,加入500μl緩沖液WB至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;

11.將吸附柱重新套回收集管中,加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;

注意:DNA Wash Buffer使用前須按要求用無(wú)水乙醇稀釋。如果放入冰箱中,使用前須恢復到室溫。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,8,000×g離心1min,棄去流出液;

13.將吸附柱重新套回2ml收集管中,轉速(>13000×g)離心空結合柱1min以干燥柱子的基質(zhì);這一步對下面的洗脫步驟至關(guān)重要。

14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管,加入50-150μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min;

15. 室溫下,離心(>13000)1min,以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。
司帕沙星英文名稱(chēng):Sparfloxacin大鼠骨堿性磷酶(BALP)ELISA試劑盒規格:200mg保存:-20℃,避光

司坦唑英文名稱(chēng):Stanozolol人協(xié)同刺激分子受體(CMR)ELISA試劑盒 規格:100mg保存:-20℃,避光

絲裂英文名稱(chēng):Mitomycin大鼠橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α (sm Actinin-α )ELISA試劑盒規格:25mg保存:-20℃,避光

絲石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖英文名稱(chēng):Gypsophila saponin 3-O- beta -D- glucuronic acid methyl小鼠煙酰胺腺嘌呤二核苷磷(NADPH)ELISA試劑盒規格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光

斯皮諾素英文名稱(chēng):Spinosin人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)ELISA試劑盒規格:20mg保存:-20℃,避光

斯皮諾素;棘苷英文名稱(chēng):Spinosin; spinosin小鼠Ⅰ型膠原(Col Ⅰ) ELISA試劑盒規格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光

四環(huán)類(lèi)雜質(zhì)對照品英文名稱(chēng):Tetracyclic impurity reference大鼠干細胞因子受體(SCFR)ELISA試劑盒規格:50mg保存:-20℃,避光

四環(huán)素英文名稱(chēng):Tetracycline大鼠抗單核細胞抗體(AMA)ELISA試劑盒規格:200mg保存:-20℃,避光

四鈉亮綠對照培養礎英文名稱(chēng):Four sulfonic acid sodium light green contrast medium base大鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA試劑盒規格:4.5g/100ml保存:-20℃,避光

四英文名稱(chēng):Tetrahydrofuran大鼠抗內皮細胞抗體(AECA)ELISA試劑盒規格:1ml保存:-20℃,避光

四姜黃素英文名稱(chēng):Four hydrogen curcumin小鼠乙酰膽堿(ACH)ELISA試劑盒規格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光

四小檗堿英文名稱(chēng):Four berberine bisulfate人組胺(HIS)ELISA試劑盒規格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光

松柏英文名稱(chēng):Coniferyl alcohol鴨抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)ELISA試劑盒規格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光

松柏英文名稱(chēng):Coniferyl aldehyde鴨環(huán)磷腺苷(cAMP)ELISA試劑盒規格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光

松果菊苷英文名稱(chēng):Echinacoside小鼠巨噬細胞來(lái)源的趨因子(MDC/CCL22)ELISA試劑盒規格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光

5-Hydroxy-2-nitrobenzaldehyde,98%大鼠β內啡肽(β-EP) 進(jìn)口/國產(chǎn)

4-Bromobenzaldehyde diethyl acetal,99%人αL巖藻糖苷酶(AFU) 進(jìn)口/國產(chǎn)

3-Bromobenzaldehyde Diethyl Acetal,98%小鼠αL巖藻糖苷酶(AFU) 進(jìn)口/國產(chǎn)

2-Bromobenzaldehyde Diethyl Acetal,98%大鼠αL巖藻糖苷酶(AFU) 進(jìn)口/國產(chǎn)

4-Quinolinecarboxaldehyde,97%犬5羥色胺(5-HT) 進(jìn)口/國產(chǎn)

5-Methoxyindole-3-carboxaldehyde,≥99%人5羥色胺(5-HT) 進(jìn)口/國產(chǎn)

3,4-Difluorobenzaldehyde,97%小鼠5羥色胺(5-HT) 進(jìn)口/國產(chǎn)

2,4-Difluorobenzaldehyde,98%大鼠5羥色胺(5-HT) 進(jìn)口/國產(chǎn)
轉基因元件pUbi PCR試劑盒規格Penicillium│sp.提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領(lǐng)域: 產(chǎn)生果膠酶培養基: 0015生長(cháng)條件: 25-28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

Tricholoma│acerbum (Bull.) Vent.分離基物: 菌體提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 14生長(cháng)條件: 25存儲條件: 定期移植法

Glomerella│cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk分離基物: 北京楊提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 14生長(cháng)條件: 25存儲條件: 定期移植法

Eupenicillium│sp.分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領(lǐng)域: ;抗白色念珠菌培養基: CM0018生長(cháng)條件: 26C存儲條件: -80℃冰箱凍結;礦物油法;定期移植法

Cyathus│olla提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 14生長(cháng)條件: 25℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法;定期移植法;其他

Escherichia│coli分離基物: 犢牛糞便提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no應用領(lǐng)域: 科研及血清定型培養基: 335生長(cháng)條件: 37存儲條件: 真空冷凍干燥法;

Fomitopsis│pinicola (Sw.) P. Karst.分離基物: 菌蓋或菌柄提供形式: 斜面培養物模式菌株: no培養基: 14生長(cháng)條件: 26存儲條件: 定期移植法

Aspergillus│toxicarius提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no應用領(lǐng)域: 產(chǎn)生黃B1,B2,G1,G2.培養基: 0015生長(cháng)條件: 25-28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

Alteromonas│sp.分離基物: 水樣/深海海水提供形式: 斜面培養物模式菌株: no應用領(lǐng)域: 產(chǎn)酶微生物/產(chǎn)蛋白酶、淀粉酶菌株培養基: 471生長(cháng)條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法


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