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H輔酶ⅠNAD測試劑盒微量法
  • 品牌:聯(lián)祖
  • 產(chǎn)地:國產(chǎn)
  • 型號:100管/48樣
  • 貨號:LZ-01321S
  • 價(jià)格: ¥電詢(xún)
  • 發(fā)布日期: 2022-04-19
  • 更新日期: 2024-07-18
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 國產(chǎn)
品牌 聯(lián)祖
貨號 LZ-01321S
用途 產(chǎn)品僅供于科研
純度 %
別名 輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒
規格 100管/48樣
是否進(jìn)口
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來(lái)不必要的損失,請仔細閱讀購買(mǎi)說(shuō)明!

產(chǎn)品名稱(chēng)

規格

檢測方法

貨號

H輔酶ⅠNAD測試劑盒微量法

100管/48樣

微量法

LZ-01321S


商品介紹:
測定意義
輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(huán)(TCA)的主要氫受體,生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成ATP的同時(shí),形成大量的ROS,同時(shí)NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應絕大部分通過(guò)這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)的強弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說(shuō)明細胞呼吸耗氧量較高,處于過(guò)氧化狀態(tài)。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外,NAD+降解產(chǎn)物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。
測定原理
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH,NADH通過(guò)PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在570nm下檢測吸光值;而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,進(jìn)一步采用MTT還原法檢測。
需自備的儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、臺式離心機、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
實(shí)驗通用規則:
1、將液體加到酶標孔中時(shí),避免槍頭和孔內液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會(huì )自然流下去。
2、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準確。
3、溫浴時(shí),要用不干膠或膠帶紙封好酶標板,防止水分的蒸發(fā)。
4、洗液不夠時(shí),可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(cháng)期保存。
5、實(shí)驗時(shí),要使底物避光保存。
6、洗板時(shí),每次洗液加入后,應靜置1分鐘,使清洗更加。沒(méi)有洗板機時(shí),倒去液體后,要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
7、要在實(shí)驗前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復到室溫,以使結果更穩定。
8、吸取液體時(shí),要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
9、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后,要更換槍頭。即使是吸取標準品時(shí)。
10、液體全部加完后,可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒,混勻液體。也可以用酶標儀的晃動(dòng)功能。
血液樣本的收集:
全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì )出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。
ALS2CR8 肌側索硬化2染色體區域候選蛋白8抗體
ATP6IP2 ATP酶H+轉運溶酶體輔助蛋白2抗體
Azurocidin 肝素結合蛋白/陽(yáng)離子蛋白37/天青殺素抗體
Alpha-Synuclein 核突觸蛋白抗體
beta-Actin (Loading Control) β-肌動(dòng)蛋白/β-Actin 抗體(內參抗體)
beta-Amyloid 1-42 (CT) β淀粉樣肽1-42(C端)/β-Amyloid 1-42 (CT)抗體
beta Amyloid 1-16 β淀粉樣肽1-16/Aβ1-16抗體
beta Amyloid 1-28 β淀粉樣肽1-28/β-Amyloid 1-28抗體
ARIP2a 激活素受體2A抗體
Aquaporin 5 水通道蛋白5抗體
beta Amyloid 1-40 β淀粉樣肽(1-40)抗體
beta Amyloid 1-42 β淀粉樣肽(1-42)抗體
APOA1 載脂蛋白A1抗體
Beta-arrestin 1 β-抑制蛋白1抗體
Ankyrin B 錨定蛋白B抗體
ATP7A 銅轉運蛋白質(zhì)α鏈抗體
Amphetamine(2A3F) 克隆/ASMTL ASMTL蛋白抗體
TRA16 激素受體相關(guān)蛋白16抗體
人胚胎心肌組織來(lái)源細胞;CCC-HEH-2
人胚胎腸粘膜組織來(lái)源細胞;CCC-HIE-2
人胚胎組織來(lái)源細胞;CCC-HPE-2
人胚胎肌肉組織來(lái)源細胞;CCC-HSM-2
人葡萄膜黑色素細胞;UM
人胚;WI-38 [WI38]
SV40T轉化的人胚腎細胞(亞系);293T/17
293來(lái)源病毒包裝細胞;ΦA
293來(lái)源病毒包裝細胞;ΦA-GP
人永生化表皮細胞;HaCaT
SV-40轉化;WI38/VA13
人乳腺上皮細胞;MCF-10A
人胚;MRC-5
人胚肺二倍體細胞;2BS
人胚肺二倍體細胞;KMB-17
人胚腎細胞;293 [HEK-293]
人臍內皮細胞;HUV-EC
人肺細胞;HLF-a
人胚;WI-38 [WI38]
人胎兒胸腺細胞株;HFT-8810 [HFT8810]
人胚;HFL1
H輔酶ⅠNAD測試劑盒微量法人胚腎細胞;293 [HEK-293]
人羊膜細胞;HA
人胚;HFL-I
操作步驟:
實(shí)驗開(kāi)始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應對樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)允瓜♂尯蟮臉悠贩显噭┖械臋z測范圍,計算時(shí)再乘以相應的稀釋倍數。
1.        加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實(shí)驗結果有效性,每次實(shí)驗請使用新的標準品溶液。
2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。
3.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。
4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。
5.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。
6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內,此時(shí)肉眼可見(jiàn)標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時(shí)藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗結果的準確性,底物反應時(shí)間到后應盡快加入終止液。
8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長(cháng)依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進(jìn)行檢測。
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