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宿主細胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒(磁珠法)
  • 品牌:聯(lián)祖
  • 發(fā)布日期: 2022-10-14
  • 更新日期: 2024-07-18
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宿主細胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒(磁珠法)
試劑盒簡(jiǎn)介:

宿主細胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒(磁珠法)用于樣本的前處理,可穩定高效地提 取出樣本中殘留的痕量宿主 DNA。

試劑盒組分:
序號 試劑 規格 儲存條件





1 裂解液 15ml×1 瓶




室溫
結合液(異丙醇) 空瓶
洗滌液 40ml×2 瓶
樣本稀釋液 15ml×1 瓶
5M NaCl 1ml×1 管
蛋白酶 K 1ml×1 管
磁珠 6ml×1 瓶
洗脫液 10ml×1 瓶

2 肝糖原 1ml×1 管 -20oC
tRNA 50ul×1 管
有效期: 12 個(gè)月
實(shí)驗所需但試劑盒未包含成分:

? 無(wú)水乙醇
? 異丙醇
? 一次性手套
? 1.5ml 離心管
? PCR 管
? 1000ul 、100ul 、10ul 無(wú)菌濾芯低吸附移液槍頭

相關(guān)設備:

? 離心機
? 渦旋振蕩器
? 旋轉混勻器
? 磁力架
? 恒溫水浴鍋或金屬浴

? 1000ul 、100ul 、10ul 、2.5ul 移液器

實(shí)驗操作細則:

一、 樣本處理:
1.   取 100ul 待檢樣本至 1.5ml 干凈的離心管中,加入 10ul 5M  NaCl  溶液,用渦旋      振 蕩器充分震蕩 10 秒;
2.   加入 10ul 蛋白酶 K,在渦旋振蕩器上充分震蕩 10 秒;
3.   配制新鮮的裂解液,其組成為: 130ul  裂解液/100ul  樣本, 9ul  肝糖原/100  樣本, 0.2ul tRNA/100ul 樣本,充分混勻以制成新鮮配制的裂解液;
4.  將 139ul 新鮮配制的裂解液加入到樣本管中, 然后用渦旋振蕩器充分震蕩 10 秒, 取出短 暫快速離心 5 秒,然后放置在 56oC 孵育 30 分鐘;
二、 DNA 捕獲:
1.     將磁珠充分渦旋振蕩以完全重懸;
2.     將樣本管從孵育器中取出, 進(jìn)行簡(jiǎn)短的離心,將液體收集到管底,然后加入完全重懸的 磁珠 60ul 和 230ul 結合液,在渦旋振蕩器上充分震蕩 10 秒; (注意: 在加入磁珠時(shí), 需經(jīng) 常振蕩重懸磁珠, 以保證吸取時(shí)磁珠的均勻性。建議每加 3-4 組樣本后, 重懸磁珠后再進(jìn)行 后續樣本的添加)
3.     將震蕩后的樣本管,置于旋轉混勻器或渦旋振蕩器上 10 分鐘以進(jìn)行磁珠捕獲;
4.     將樣本管從旋轉混勻器上取下,在 10000g 的條件下離心 1 分鐘使磁珠充分聚集;
5.     將離心后的樣本管置于磁力架上, 待溶液完全澄清后, 用槍頭小心移去上清(注: 避免 槍頭攪動(dòng)磁珠,使得磁珠同上清一起被除去從而影響得率);
三、 洗滌:
1.     樣本管移去上清后,不必將樣本管從磁力架上取下,直接加入 400ul 洗滌液;
2.     待溶液完全澄清后,磁珠完全分離,用槍頭小心移去上清;


3.     保持樣本管在磁力架上, 加入 400ul 洗滌液, 待溶液澄清, 磁珠完全分離后, 用槍頭小 心移去上清;
4.     將樣本管從磁力架上取下, 于 10000g 的條件下離心 30 秒,使得殘留的洗滌液完全聚集 到管底;
5.     將樣本管置于磁力架上,待磁珠完全分離后,用 10ul 槍頭小心移除殘留的液體;
6.     將樣本管從磁力架上取下,置于 70oC 金屬浴中,放置 4 分鐘, 除去殘留的乙醇(注: 若干燥不夠, 殘留的乙醇會(huì )影響后續的定量檢測反應);待磁珠團出現裂紋時(shí),將樣本管從 金屬浴中取出進(jìn)行 DNA 洗脫;
四、 DNA 洗脫:
1.     沿著(zhù)樣本管的管壁加入 50- 100ul 洗脫液,用 100ul 的槍頭反復吹吸,以完全重懸磁珠;
2.     將樣本管置于 70oC 孵育器孵育 10 分鐘;
3.     將樣本管從孵育器中取出,于 20000g 離心 2 分鐘,然后至于磁力架上,待磁珠完全分 離后,用 10ul 槍頭小心將上清液體轉移至新的干凈的離心管中;
4.      為了避免吸入磁珠,在離心管中還剩余少量液體時(shí),將其于 20000g 離心 2 分鐘,然后 至于磁力架上以吸出剩余的液體。



注意事項:

1.   在結合操作時(shí)請確保磁珠與樣本充分混勻,建議使用混勻儀或渦旋振蕩器。
2.   洗滌操作后如果管底殘留有液體,請再次短暫離心后放于磁力架磁性分離,用小槍頭吸 出洗滌液。
3.   每次操作請勿吸出磁珠,保證磁珠加入后一直在管中,只操作上清。

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